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糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒如何檢測雙抗體呢？
2020-08-14 瀏覽次數(shù)：2120
糞便鈣衛(wèi)蛋白是診斷腸炎疾病嚴(yán)重性的一個(gè)指標(biāo)，腸炎性疾病（IBD）患者的糞便鈣衛(wèi)蛋白濃度高，其疾病復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)增大。低糞便鈣衛(wèi)蛋白濃度與腸的同種異體移植排斥的低風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。該檢測使用特異性單克隆抗體，確保測試只檢測到鈣衛(wèi)蛋白。因此糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒是比不可少的。
糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒用于檢測雙抗體步驟:
(1) 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，CALPRO試劑盒，糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
(2) 加樣：CALPRO試劑盒，糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
(3) 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
(4) 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
(5) 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測O?D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，CALPRO試劑盒，糞便鈣衛(wèi)蛋白試劑盒以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。
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